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Microscopio fluorescente Usos, precios, reseñas |
Fruto de una larga evolución, el microscopio, gracias a su capacidad de sondear lo infinitamente pequeño, ha fascinado a la humanidad desde su nacimiento, a finales del siglo XVI. Para la mayoría de nosotros, es una herramienta que, de forma casi mágica, nos permite analizar microorganismos. Sin embargo, para aquellos que han trabajado con microscopio, el microscopio no tiene secretos. Y no sólo eso, quienes utilizan este aparato para trabajar saben muy bien que no todos los microscopios son iguales y que cada disciplina científica requiere de un dispositivo específico. En este artículo consideraremos, en particular, el microscopio óptico de fluorescencia.
🔬 Un microscopio para cada uso
Antes de entrar en el análisis específico del microscopio óptico de fluorescencia, es necesario aclarar los diferentes tipos de microscopios que existen en el mercado. Atribuido por la mayoría a Galileo Galilei, el nacimiento del microscopio es en realidad controvertido. Algunos estudiosos atribuyen el descubrimiento al holandés Zacaria Jannes, quien alrededor de 1595 construyó un microscopio rudimentario con tres tubos que se deslizaban uno dentro del otro. Es cierto que Galileo Galilei creó un prototipo al que llamó “una pequeña lente para ver cosas diminutas”. En cualquier caso, durante los siguientes 200 años, a pesar de algunas mejoras, el microscopio no experimentó una evolución significativa.
Un verdadero salto de calidad se produjo solo a principios del siglo XIX, cuando el microscopio óptico se estableció como un instrumento indispensable en todos los laboratorios de anatomía. El microscopio electrónico es definitivamente más moderno y sofisticado. Inventado por el físico alemán Ernst Kuska y el ingeniero estadounidense Max Knoll en 1931, es un dispositivo capaz de realizar aumentos considerablemente superiores a los que se pueden conseguir con el microscopio óptico, y es decididamente más sofisticado. Aclarada la diferencia entre un microscopio electrónico y un microscopio óptico, pasemos ahora a los detalles de este último, analizando las diferencias, a veces sustanciales, entre los distintos aparatos. El más común, también apto para uso amateur, es el microscopio óptico, mecánico o digital. Mucho más sofisticado y especialmente adecuado para su uso en biología es el microscopio óptico de fluorescencia.
🔬 ¿Qué es la fluorescencia?
El término fluorescencia deriva de la fluorita, un mineral que, cuando es alcanzado por la luz, emite luz. Esta propiedad, típica también de otros materiales llamados fluorescentes, constituyó un descubrimiento fundamental para la microscopía. De hecho, gracias a la fluorescencia, es posible distinguir diferentes células dentro de la misma muestra.
La fluorescencia se diferencia de la fosforescencia en que reacciona de manera diferente a la luz. Los minerales fluorescentes dejan de emitir luz en el mismo momento en que cesa el estímulo luminoso que los incide. Los materiales fosforescentes, por otro lado, acumulan la luz recibida y continúan emitiéndola durante un cierto período de tiempo, incluso después de que se haya eliminado el estímulo luminoso.
🔬 Cómo funciona el microscopio óptico de fluorescencia
El microscopio óptico, como sabemos, utiliza luz visible para capturar la imagen de la muestra colocada debajo del objetivo y transmitirla al ocular.
Cabe destacar que no todas las células reaccionan del mismo modo a los fluorocromos y que no todos los fluorocromos son iguales. Este concepto es importante para entender cómo funciona realmente el microscopio de fluorescencia y cómo se pueden identificar diferentes células de la misma muestra gracias a diferentes tinciones. Mediante el uso de diferentes tipos de fluorocromos, el observador puede distinguir, por ejemplo, células sanas de células enfermas dentro de una misma muestra. También hay que decir que el observador que utiliza un microscopio de fluorescencia analiza la luz emitida por la muestra, no la luz que pasa a través de la muestra como, en cambio, ocurre con el microscopio óptico tradicional.
🔬 Elementos que lo caracterizan
El microscopio de fluorescencia es un microscopio óptico que utiliza luz ultravioleta para analizar microorganismos. La observación se realiza utilizando las propiedades fluorescentes y fosforescentes de los minerales con los que las muestras entran en contacto. Teniendo en cuenta lo anterior, se puede deducir que este tipo de microscopio requiere de una lámpara que genere luz ultravioleta. Así que veamos cuáles son los componentes específicos. del microscopio óptico de fluorescencia:
- Lámpara de arco de vapor de mercurio: que emite luz ultravioleta;
- Filtro de excitación: es utilizado por el observador para ajustar la longitud de onda de la luz ultravioleta. La longitud de onda elegida determina el color de la muestra, que puede ser verde, rojo o azul.
- Condensador de campo oscuro: es un sistema de lentes que dirige la luz al objetivo y, desde el objetivo al ocular. En el microscopio óptico tradicional tiene un fondo blanco; Sin embargo, en el microscopio de fluorescencia se prefiere el condensador de campo oscuro para favorecer el contraste con la muestra que se está analizando. Los organismos tratados con el fluorocromo y expuestos a la luz violeta, adquieren los colores: verde, rojo o azul, dependiendo de la longitud de onda utilizada.
- Filtro de barrera: es un accesorio esencial para la seguridad del operador. Consiste en un filtro amarillo fabricado en plexiglás u otro material transparente especialmente tratado, que sirve para proteger los ojos de la luz ultravioleta. El contacto, incluso mínimo, con los rayos ultravioleta, podría, de hecho, dañar irreversiblemente la vista.
Por lo demás, el microscopio electrónico es en todos los aspectos un microscopio óptico, equipado con objetivos y oculares. La regla básica al elegir el dispositivo a comprar, por lo tanto, es la misma: asegúrese de que las lentes sean de calidad.
Cuanto mayor sea la calidad de las lentes, mejor será la calidad de la visión. La palabra clave es: vidrio. Algunos microscopios especialmente baratos tienen lentes de plástico, pero estos son poco más que juguetes.
Lentes de vidrio, por tanto, y posiblemente de calidad, para que sean capaces de corregir esas distorsiones (conocidas en la jerga científica como aberraciones) que se crean cuando la luz pasa a través de las lentes. Como hemos dicho, la calidad de las lentes es fundamental y decisiva para el precio final del dispositivo. Hay 3 tipos de lentes que se montan en los objetivos: acromática, apocromática, semiapocromática (con fluorita)
| acromático | no corrige aberraciones | barato | ||||||||||
| apocromático | corrige todas las aberraciones | alto | ||||||||||
| semiapocromático (fluorita) | 🔬 ¿Cuántos aumentos se pueden lograr con este tipo de microscopio?Como ya hemos mencionado, el microscopio de fluorescencia es un microscopio óptico equipado con una lámpara especial capaz de resaltar la fluorescencia presente en las muestras tratadas. Por lo tanto, el aumento que se puede lograr es el mismo que el de un microscopio óptico mecánico tradicional. El aumento total se obtiene multiplicando la capacidad de aumento del objetivo por la del ocular. Con un ocular de 10x (leer 10 veces) y un objetivo de 100x, se obtiene un aumento de 1000x. (10×100=1000). Esto significa que verá el objeto ampliado 1000 veces, el máximo que se puede lograr con un microscopio óptico con un ocular estándar de 10x. Sólo unos pocos dispositivos de gama alta están equipados con lentes de 15x o incluso de 20x. En estos casos se pueden alcanzar los 1500x pero es necesario contar con una herramienta profesional. El objetivo, por otro lado, oscila entre 4x y 100x. La mayoría de los microscopios vienen con los 3 objetivos clásicos: 10x, 40x; 100x Cada objetivo está identificado por una banda de color diferente. Por convención, 10x es amarillo; el 40x es azul; El 100 x es blanco. Algunos microscopios también están equipados con un objetivo de 4x identificado por el color rojo.
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